Исследование донорской крови на инфекции

Москвичи, переболевшие коронавирусной инфекцией, могут стать донорами плазмы крови. Процедура переливания позволяет помочь тем, кто переносит COVID-19 особенно тяжело.

По мнению экспертов клинического комитета Департамента здравоохранения Москвы, переливание плазмы крови COVREC (с антителами к коронавирусной инфекции) — один из потенциально эффективных методов лечения заболевания.

В столице донорами плазмы для лечения пациентов с COVID-19 стали уже около тысячи человек.

О том, как проходит процесс сдачи биоматериала, какие существуют особенности и противопоказания, — в материале mos.ru.

Спасти минимум двоих

У пациентов, госпитализированных в столичные медицинские организации с новой коронавирусной инфекцией, проходит 15–20 трансфузий плазмы реконвалесцентов ежедневно. Такие данные приводит заведующий отделением клинической и производственной трансфузиологии и гравитационной хирургии крови НИИ скорой помощи имени Н.В. Склифосовского Александр Костин.

«Кому-то хватает одной трансфузии, кому-то необходимо выполнить два, редко три переливания», — говорит он.

Один донор сдает 600–650 миллилитров плазмы. Эта доза делится на две или три части и может помочь двум — трем больным. Сдать плазму крови можно через две недели после полного выздоровления.

Доноры, у которых констатирован хороший иммунный ответ, могут повторить процедуру еще раз через две недели.

Больница № 52 принимает доноров плазмы для лечения коронавирусаДоноры крови с антителами к COVID-19 будут получать стимулирующие выплаты

Диета и не только

Стать донором может не каждый. При наличии серьезных заболеваний (ВИЧ, гепатиты, туберкулез и другие хронические заболевания) донорство запрещено пожизненно. Есть ряд других ограничений: возраст, вес, беременность. Также причиной временного запрета на сдачу крови может стать прием определенных лекарств или недавняя татуировка.

«Поскольку данная вирусная инфекция является новой и проходит она у части пациентов не очень легко, мы ограничили возрастной период для осуществления донаций от 18 до 55 лет. Так же, как это сделали многие наши зарубежные коллеги. Наша основная цель — ни в коем случае не навредить донору!» — отмечает Александр Костин.

Перед сдачей крови важно исключить прием алкоголя и жирной пищи в течение 48 часов. Если вы нарушили диету, пытаться обмануть врачей бесполезно: это станет заметно уже во время процедуры по качеству плазмы, и процесс сдачи придется прервать.

Подробная памятка для доноров — на портале «Я дома».

Исследование донорской крови на инфекции

Контроль качества

Перед тем как пригласить граждан России на сдачу плазмы, специалисты тщательно выясняют историю их болезни.

«Всех, кто оставил заявки в кол-центре, мы проверяем по системе ЕМИАС, выясняем, что человек действительно переболел, что прошло достаточно времени после выздоровления, что у него отрицательные тесты на COVID», — говорит Александр Костин.

На месте у донора берут дополнительные анализы, а проверка биоматериала начинают уже в процессе сдачи крови.

«Непосредственно после процедуры заготовки плазма подвергается специальной обработке — фотохимической инактивации патогенов. Мы добавляем определенные вещества в плазму, подвергаем ее ультрафиолетовому облучению либо облучению видимым цветом.

Это стандартизованная методика, которая призвана убрать оттуда те потенциальные патогенные микроорганизмы, на которые мы донора не тестируем. Кроме того, обязательным является исследование на гемотрансмиссивные инфекции (гепатит В, С, ВИЧ, сифилис).

Результаты обычно бывают готовы на следующий день, и до завершения этого процесса плазма не используется для пациентов», — поясняет врач.

Исследование донорской крови на инфекции

Три стадии проверки

Новая коронавирусная инфекция изучена недостаточно, поэтому специалисты не просто занимаются забором биоматериала, но и исследуют, как доноры переносили болезнь, проверяют количество антител с помощью различных методик.

«Мы пытаемся, выясняя анамнез, узнать, как именно протекало заболевание, и отсеять людей, которые перенесли его слишком легко, практически не замечая. Дело в том, что не все люди одинаково реагируют на данную инфекцию и у всех по-разному вырабатываются антитела.

Например, если у человека была температура выше 38 градусов в течение трех и более дней, то, скорее всего, это будет сопряжено с более выраженной выработкой антител. А если вирус остался на первой линии обороны иммунной системы, то большого количества антител не будет.

Мы же хотим собрать плазму, богатую антителами», — поясняет Александр Костин.

У переболевших коронавирусом проверяют уровни антител различными методами ИФА к разным вирусным белкам.

«Мы приходим к выводу, что имеет значение одновременное наличие у донора как IgG, так и IgМ. По совокупности показателей принимается решение: какой донор подходит больше.

Четкое пороговое значение для уровня выявляемых антител мы пока устанавливаем.

Но даже после того, как донор сдал плазму и она уже потенциально готова к клиническому применению, мы ждем тест из института Гамалеи, где наиболее точно подтверждается наличие вирус-нейтрализующих антител», — добавляет Александр Костин.

Потенциальные доноры — те, в крови которых содержатся оба вида антител — IgG и IgM. Наличие этих показателей — достаточная причина, чтобы попробовать пройти отбор, даже если «официально» вы не болели и антитела выявили в результате скрининга в поликлинике. Уже в пункте сдачи крови донору проведут уточняющий дополнительный анализ, чтобы определить ценность плазмы.

Первичный опрос проводит кол-центр. Затем уже с потенциальным донором связывается медицинское учреждение. По результатам беседы принимается решение — приглашать или нет конкретного человека на сдачу плазмы.

Сейчас система работы с донорами перестраивается в трехэтапную. Сначала разговор по телефону, затем — первичные анализы в медучреждении и уже потом, на следующий день, переболевшего коронавирусом приглашают сдать плазму. Такая схема позволяет производить забор только у тех, чья плазма действительно богата антителами и сможет реально помочь в лечении болезни.

Исследование донорской крови на инфекции

На базе НИИ скорой помощи имени Н.В. Склифосовского открыт стационар для долечивания пациентов с коронавирусомБорьба с коронавирусом: как работает лаборатория НИИ скорой помощи имени Н.В. Склифосовского

Доноров ждут

В среднем институт имени Н.В. Склифосовского принимает 10–20 доноров плазмы, переболевших коронавирусом, в день. Пункт работает в первой половине дня без выходных. Одновременно кровь в нем могут сдавать до 10 доноров. В случае большого числа желающих количество мест и часы работы будут увеличены. 

«Желательно, чтобы доноров было больше. Потому что если начать применять плазму повсеместно во всех стационарах, то этого количества точно не хватит. Мы не знаем, когда эпидемия пойдет на спад и сколько еще понадобится трансфузий. Но, по моему мнению, было бы неплохо, если бы доноров было больше, хотя бы раза в два-три», — говорит Александр Костин.

Процесс сдачи плазмы занимает около 40 минут.

В это время с помощью аппарата для плазмофереза кровь донора разделяется на плазму и клеточную фракцию, эритроциты и другие клетки крови возвращаются обратно, заготовленная плазма переводится в гемоконтейнер. Если у донора маленький вес или тонкие вены, у него могут взять не 600, а, например, 400 миллилитров плазмы. Это тоже существенная помощь.

Для многих забор плазмы — менее стрессовый процесс, чем полноценная сдача крови. После процедуры донор еще 20 минут находится под наблюдением врачей.

Плазму сейчас можно сдать в четырех медучреждениях: Центре крови имени О.К. Гаврилова (Бакинская улица, дом 31), Научно-исследовательском институте скорой помощи имени Н.В.

Склифосовского (Большая Сухаревская площадь, дом 3, корпус 12), городской клинической больнице № 52 (Пехотная улица, дом 3, корпус 1) и городской клинической больнице имени М.П.

Кончаловского (Зеленоград, Каштановая аллея, дом 2, строение 1).

Кроме того, плазму могут собирать на организованных акциях: например, на днях такая акция прошла на площадке клуба «Мой социальный центр» в Южном Бутове. Донорами плазмы стали социальные работники, переболевшие COVID-19. Некоторые из них поделились историями о борьбе с болезнью.

Когда плазма особенно нужна

Мария Комарова — социальный работник филиала «Лефортово» ТЦСО «Южнопортовый», где она трудится уже семь лет.

«Я заболела 13 апреля и сразу вызвала врача. Два дня у меня была высокая температура, слабость, ломота, дней пять не было обоняния и вкуса. Не знаю, где могла заразиться, ведь регулярно мыла руки, носила маски и перчатки. Лечилась дома. Боялась осложнений, но все обошлось», — рассказывает Мария Комарова.

Исследование донорской крови на инфекции

В конце апреля больничный закрыли, и спустя месяц, на площадке клуба «Мой социальный центр» в Южном Бутове, Мария сдала плазму крови.

Читайте также:  Еда для свежего дыхания

«Я сразу решила, что, если у меня будут антитела, я сдам плазму, чтобы кому-то помочь. Я очень переживала, но врач на месте успокоила меня. Она объяснила, что плазму сдавать легче, чем кровь.

Процедура длится около 40 минут, забирается только плазма, а остальные компоненты возвращаются донору. Я успокоилась уже в процессе сдачи.

Процедура прошла хорошо, не было никаких неприятных ощущений и дискомфорта», — говорит Мария Комарова.

Еще один донор — Евгений Чиненов. Он работает в филиале «Отрадное» ТЦСО «Бабушкинский» социальным помощником. В связи с пандемией работу не прекращал — такова специфика помощи людям с ограниченными возможностями здоровья.

Исследование донорской крови на инфекции

«Еще когда я болел, узнал, что можно будет сдать кровь, и захотел помочь тем, кто тяжело переносит болезнь. Тем более у нас такая профессия — людям помогать. А тут еще одна возможность — почему нет», — говорит Евгений Чиненов.

Мужчина был донором еще во времена студенчества. Так что страха перед процедурой не было. «В такой ситуации ведь может оказаться любой из нас. Поэтому любая помощь важна. Мы один народ, одна страна, одна большая семья. Нужно помогать друг другу», — говорит Евгений Чиненов.

Доноры плазмы с антителами к COVID-19 смогут бесплатно доехать на такси до пункта сдачи кровиПереливание плазмы крови с антителами к COVID-19 может помочь в борьбе с пандемией

Василий Федотов — сотрудник ТЦСО «Алексеевский». В период режима повышенной готовности старался соблюдать самоизоляцию и работать из дома.

«В середине апреля у меня поднялась температура. Потом начала болеть супруга, у нас обоих пропало обоняние, и мы вызвали врача из поликлиники. Наши тесты показали положительные результаты», — рассказывает Василий Федотов.

Исследование донорской крови на инфекции

Получив лекарства, пара прошла лечение дома. После этого два теста показали отрицательные результаты. 20 мая Василий сдал плазму крови в институте скорой помощи имени Н.В. Склифосовского. Был донором впервые.

«Донация заняла 43 минуты. Попали в вену сразу, ни одного синяка, я ничего не почувствовал. Медсестры все объясняют, помогают, несколько раз подходили и проверяли, что все нормально. Никакого дискомфорта не было. После сдачи крови было легкое головокружение, не более того», — рассказывает Василий Федотов.

В больнице он узнал, что у него самая востребованная при сдаче группа крови — первая отрицательная. Так что в дальнейшем мужчина планирует продолжить заниматься донорством.

«Мне кажется, это две разные ситуации: просто сдать кровь или сделать это во время пандемии, когда донорская плазма становится особенно нужной и может спасти чью-то жизнь, помочь тем, кто болеет очень тяжело.

Это не просто сдать кровь в банк, а помощь конкретному человеку. Общество — это единый механизм, и если мы все подключимся, то быстрее поборем эту пандемию и вернемся к привычной жизни», — говорит Василий Федотов.

Для горожан, которые переболели коронавирусной инфекцией и хотели бы стать донорами плазмы, работает специальная горячая линия. Записаться на сдачу крови можно по телефону: +7 (495) 870-45-16. Номер доступен ежедневно с 09:00 до 19:00.

Донором плазмы крови может стать человек в возрасте от 18 до 55 лет, переболевший коронавирусной инфекцией и при этом не имеющий хронических заболеваний. Также у него должны быть отрицательные анализы на ВИЧ, гепатиты В и С. Согласно постановлению Сергея Собянина, доноры получают стимулирующую выплату в размере пяти тысяч рублей за 600 миллилитров плазмы.

Исследование донорской крови

  • определяют группу крови по системам (АВ0, Rh- и Kell);
  • тестируют на наличие антител к эритроцитам и
  • на наличие возбудителей четырех передающихся через кровь заболеваний: гепатита В, гепатита С, сифилиса и ВИЧ.

У первичного донора определяют группу крови по системе АВ0 уже при первом посещении, так как определение проводится экспресс-методом в ходе медосмотра и позднее проверяется в лаборатории.

Резус-фактор определяется только в лаборатории, и донор узнает его при втором посещении Центра крови.

Перед сдачей крови в капле крови, взятой из пальца донора, определяется также и уровень гемоглобина. Нормы содержания гемоглобина:

  • у женщин 125-165 г/л
  • у мужчин 135-180 г/л

При необходимости у доноров измеряют кровяное давление и пульс. Их нормы:

  • кровяное давление 100/60-180/100 мм рт. ст.
  • пульс 50-100 ударов в минуту

Исследование донорской крови на инфекции

Специалист лаборатории Лийна Тедер определяет группу крови донора

В целях обеспечения безопасности крови для каждой сданной дозы крови приводят следующие анализы:

  • поверхностный антиген вируса гепатита В (Hbs Ag)
  • ДНК вируса гепатита В (HCV DNA)
  • антитела вируса гепатита С (Anti-HCV)
  • РНК вируса гепатита С (HCV RNA)
  • антитела к ВИЧ (Anti-HIV-1,2) и антиген ВИЧ (HIV p24)
  • РНК вируса ВИЧ-1 (HIV-1 RNA)
  • возбудитель сифилиса

Исследования донорской крови производятся в соответствии с директивами Европейского Союза и законами Эстонской Республики.

В 2007 году в исследованиях донорской крови на вирусы был сделан еще один большой шаг вперед и определение антигена ВИЧ было заменено молекулярно-биологическим исследованием HIV-RNA PCR, которое на сегодняшний день является наиболее чувствительным и высокотехнологичным методом вирусной диагностики.

При этом способе длина периода окна составляет всего 8-12 дней. При помощи определения HIV-RNA обеспечивается максимально возможный уровень безопасности донорской крови.

Все вирусные исследования донорской крови автоматизированы и производятся с использованием систем тестирования международно признанных компаний.

Результаты анализов передаются из анализаторов непосредственно в Эстонскую информационную систему службы крови (EVI).

Центр крови не может выдавать не проанализированные или показавшие несоответствующие результаты компоненты крови, поскольку этого не допускает EVI.

Если результаты анализов требуют дополнительной проверки, донора вызывают на повторные анализы. Доза крови, в которой обнаружен возбудитель инфекции, уничтожается.

В здоровом антителе — медосмотр доноров проведут по новым правилам

Соответствующие требования включены в новые правила проведения медобследования доноров крови для допуска к донации, разработанные минздравом. Документ размещен для обсуждения на федеральном портале проектов нормативных правовых актов.

В ФМБА объяснили, почему доноров не тестируют на коронавирус

Основное новшество в том, что теперь донорскую кровь будут проверять на антитела к ядерному антигену вируса гепатита В (анти-НВс).

Как пояснили в минздраве, это связано с распространением скрытой формы течения болезни, которая очень сложно диагностируется. Раньше при обследовании выявляли лишь поверхностный антиген гепатита B.

Это действительно главный маркер острой или хронической инфекции, но он не всегда позволяет определить ее в латентном состоянии. Новое требование исключит любую возможность заражения реципиентов гепатитом B.

По новым правилам в случае сомнительных анализов на наличие инфекции донору будет сделан отвод на 120 дней, после чего его пригласят на новое обследование. Однако при повторном тестировании исследуемый образец крови при неопределенном результате будет считаться положительным, а отвод от донорства крови и ее компонентов будет уже постоянным.

«Установление клинического диагноза донору не входит в задачи службы крови», в то же время она «несет ответственность за качество и безопасность заготовленной крови и ее компонентов для здоровья реципиента», поэтому «для принятия решения не существует принципиальной разности, присутствует в организме донора вирус или реактивность сыворотки связана с неспецифической реакцией, обусловленной какой-либо иной патологией органов», говорится в пояснительной записке к проекту документа.

В Минздраве сообщили о новом порядке медосмотра водителей

Поводом для отказа в донации теперь могут стать возраст младше 20 лет и масса тела меньше 70 килограммов, раньше потенциальному донору достаточно было быть совершеннолетним и весить от 50 килограммов.

Абсолютными противопоказаниями остаются такие серьезные заболевания, как ВИЧ, сифилис, туберкулез, все вирусные гепатиты, онкология, болезни крови. В доноры не возьмут при наличии психических расстройств, инвалидности I и II группы.

Запрещено сдавать кровь при низком или высоком артериальном давлении, слабом пульсе, температуре выше 37 градусов, беременности, в течение 10-30 дней после вакцинации (зависит от прививки), при заболеваниях почек, обострении гастрита или язве желудка, в период приема антибиотиков.

Также донация исключена в течение 120 дней после некоторых косметических процедур: пирсинга, тату, иглоукалывания. Ограничено ее ежегодное количество: например, сейчас мужчины могут сдать кровь не более пяти раз в течение 12 месяцев, а женщины — не более четырех.

При этом объем плазмы, заготовленной от донора за один календарный год, не может быть более 20 литров, а донации двух и более компонентов крови за одну процедуру не должны превышать 750 милилитров. Анкеты доноров должны будут храниться в организации службы крови в течение пяти лет.

Читайте также:  7 правил похудения с помощью воды

Поводом для отказа в донации могут стать возраст младше 20 лет и масса тела меньше 70 килограммов.

В случае сомнительных анализов на наличие инфекции донору сделают отвод на 120 дней

Как рассказали в минздраве, в России число доноров увеличивается ежегодно и сейчас составляет около двух миллионов человек, получается, что на каждые 1000 человек приходится 14-15 доноров.

Однако, по данным ВОЗ, для удовлетворения потребности в крови их должно быть втрое больше, поскольку ежедневно переливание крови необходимо более чем 1,5 миллиона человек.

Число почетных доноров также растет. Чтобы попасть в их ряды, необходимо сдать кровь безвозмездно 40 раз либо 60 раз сдать кровь с компонентами. После этого донор заполняет заявление на станции переливания и через несколько месяцев получает главные документы: удостоверение и значок.

Сегодня почетным донорам полагается ежегодная денежная выплата в размере около 15 тысяч рублей, а также льготы, которые могут отличаться в регионах.

Все доноры по закону получают два дополнительных выходных: один с сохранением средней зарплаты в день кроводачи, второй — день отдыха.

Эти дни можно использовать сразу, а можно перенести на любой другой день в течение года или присоединить к отпуску.

Диагностика ВИЧ-инфекции в службе крови

Донорская кровь в обязательном порядке тестируется для выявления АТ к ВИЧ. Однако такое исследование в ряде случаев неэффективно для обнаружения инфицированной крови в первую очередь из-за наличия серологического окна.

Сокращение инфекционного риска, связанного с серологическим окном, возможно с помощью прямых методов выявления инфекционного агента. Одним из таких методов является выявление АГ вируса. В последние годы для диагностики ВИЧ донорскую кровь исследуют на наличие р24-антигена в комплексе с АТ к ВИЧ.

Однако максимальной чувствительностью обладают тесты, направленные на выявление НК вируса.

В постановлении Правительства РФ №1230«Об утверждении правил и методов исследований и правил отбора образцов донорской крови, необходимых для применения и исполнения технического регламента о требованиях безопасности крови, ее продуктов, кровезамещающих растворов и технических средств, используемых в трансфузионно-инфузионной терапии» говорится о необходимости проведения молекулярно-биологического скрининга донорской крови: «Молекулярно-биологические исследования проводятся дополнительно (до, после, одновременно) к обязательным иммунологическим исследованиям на маркеры вирусов иммунодефицита человека и гепатитов В и С и наиболее эффективны для обеспечения безопасности компонентов крови с коротким сроком годности (менее 6 месяцев), а также для свежезамороженной плазмы, не прошедшей карантинизацию».

Классический вариант тестирования донорской крови предполагает первичное определение АТ к ВИЧ (серологический скрининг), а затем выявление РНК ВИЧ только в серонегативных образцах.

Однако при небольшом объеме исследований и невысокой частоте выявления серопозитивных образцов допустимо одновременное проведение определения АТ к ВИЧ и РНК ВИЧ.

Для сокращения стоимости тестирования донорской крови, а также для повышения производительности анализа молекулярно-биологическое исследование часто проводят в формате мини- пулов.

РНК ВИЧ является оптимальным маркером для тестирования донорской крови в период серологического окна, т.к. появляется в крови раньше всех остальных (в среднем опережая р24-антиген на 5 дней) и быстро достигает максимальной концентрации.

Преимуществом этого маркера является возможность сконцентрировать его из большого объема плазмы крови, а также одновременное тестирование других вирусных агентов.

Использование тестов, выявляющих провирусную ДНК ВИЧ, приведет к снижению выявляемости ВИЧ, поскольку провирусная ДНК появляется позже РНК, а кроме того концентрация этого маркера не высока – процент инфицированных клеток редко превышает 1.

Другим важным недостатком выявления провирусной ДНК является факт, что ДНК содержится в клетках крови, концентрировать которые не представляется возможным, что в свою очередь влияет на стоимость и производительность анализа.

Обнаружение АТ к ВИЧ и/или РНК ВИЧ в образце донорской крови является показанием для выбраковки образца, и донор отстраняется от донорства. Проведение скрининга в формате мини-пулов требует в ряде случаев проведения дополнительного этапа исследования – расшифровки позитивного мини-пула. Для этого необходимо каждый образец, входивший в позитивный пул, исследовать индивидуально.

Обнаруженные при расшифровке позитивные по одному из маркеров индивидуальные образцы должны быть забракованы, а доноры подлежат отстранению от донорства и наблюдению у врача-инфекциониста. В случае получения отрицательного результата для всех индивидуальных образцов крови результат тестирования мини-пула расценивается как ложноположительный, и доноры признаются годными для кроводачи.

Для выявления РНК ВИЧ применяют методики, основанные на АНК (ПЦР в реальном времени, TMA, NASBA). Для исследования донорской крови должны использоваться наборы реагентов, аналитическая чувствительность которых составляет 500 копий/мл при тестировании индивидуальных образцов.

При тестировании донорской крови в формате мини-пула должны использоваться наборы реагентов, чувствительность которых должна быть выше указанной пропорционально размеру пула, т.е.

, если мини-пул состоит из 10 индивидуальных образцов, то использовать можно набор реагентов с чувствительностью не ниже 50 копий/мл.

Показания к исследованию для обнаружения РНК ВИЧ

  • Тестирование донорской крови и ее компонентов в дополнение к стандартному протоколу (выявление АТ);
  • подозрение на недавнее инфицирование.

Опыт использования метода ПЦР для выявления РНК (ДНК) возбудителей вирусных гепатитов В и С у серонегативных доноров

О.А. Тарасенко,  И.А. Гукасян,  Л.В.Соболевская,  Т.В. Черненко

Станция переливания крови Департамента Здравоохранения г. Москвы

В настоящее время исследование образцов донорской крови на маркеры вирусных гепатитов В (ВГВ) и С (ВГС) проводят серологическими методами: иммуноферментным (ИФА) или иммунохемилюминисцентным  (ИХЛА) анализом, позволяющими определять  наличие  в   них поверхностного антигена ВГВ (HBsAg) и антител к белкам ВГС (анти HCV). Введение в лабораторную практику службы крови обязательного тестирования донорской крови на указанные серологические маркеры ВГВ и ВГС  позволило  значительно  снизить риск посттрансфузионной  передачи ВГС и ВГВ.

Известно, однако, что при ВГС специфические антитела появляются в среднем через 10-12 недель от момента заражения, а в некоторых случаях сроки их появления могут отодвигаться до 30-50 недель [2,6].

Поэтому при исследовании методами ИФА или ИХЛА образцов крови, взятой от донора с ранней стадией ВГС, когда антитела еще не выявляются (период, так называемого, серонегативного окна), получают, как правило, ложноотрицательный результат.

В то же время именно в этот период ВГС наблюдается, выраженная виремия  и связанная с ней высокая « инфекционная способность» инфицированной крови [3 ]. В связи с этим компоненты крови, заготовленные от донора, находящегося в периоде «серонегативного окна», являются основным источником заражения реципиента ВГС при гемотрансфузии.

Использование NAT-технологий, в частности метода ПЦР, позволяет выявить РНК HCV в крови уже через 1-2 недели после заражения, т.е. приблизительно за 60 дней до выявления в ней антител к HCV серологическими тестами.

HBsAg в большинстве случаев является наиболее значимым серологическим маркером острого и хронического ВГВ, выявление которого в крови свидетельствует с высокой степенью вероятности о присутствии в ней вируса . Однако, зарегистрированы случаи заражения ВГВ при переливании HBsAg-негативной крови.

В настоящее время известно о существовании по крайней мере двух «ускользающих (escape)» мутантов HBsAg [9,13], которые могут возникать как естественным путем в ходе инфекционного процесса, так и после противовирусной терапии.

Эти штаммы HBV способны передаваться горизонтальным путем и обусловливать ложно негативный результат при скрининге донорской крови на HBsAg. Описана, так называемая, «молчащая» форма ВГВ, характеризующаяся наличием низких концентраций вируса в крови при не детектируемом уровне HBsAg [2, 11].

Она может наблюдаться у некоторых больных после острого ВГВ с самостоятельным разрешением и даже после успешно проведенного противовирусного лечения, а также при хроническом ВГВ.

Установлено, что «молчащая» инфекция представляет клиническую форму ВГВ, способную передаваться через компоненты крови, а диагностика ее основывается на тщательном сборе анамнеза и применении высокочувствительного метода ПЦР для определения вирусной ДНК [1].

  • Задачей настоящей работы было оценить целесообразность использования метода ПЦР для скрининга донорской крови на маркеры ВГС ВГВ.
  • Пробы крови от каждого донора забирали в 2 пробирки: одну пробирку с разделительным  гелем для получения сыворотки для серологических исследований и вторую пробирку с ЭДТА для получения плазмы для ПЦР.
  • Скрининг донорских сывороток на серологические маркеры ВИЧ 1,2, ВГВ и ВГС проводили методом ИФА на аппарате Evolis (компания Biorad, США) или методом ИХЛА на аппарате Architect (компания Abott, США).
  • Для определения антител к HCV методами ИФА и ИХЛА использовали, соответственно, тест-системы Murex anti HCV (Abbott, США) и    тест-системы Architect anti HCV (компания Abbott, США).
  • Для выявления HBsAg методом ИФА использовали тест-системы Monolisa HBsAg Ultra  (Bio-Rad, США) и тест-системы Architect HBsAg (компания Abbott, США).
  • Образцы, показавшие при первичном исследовании в ИФА или ИХЛА положительный результат на анти ВИЧ 1,2, анти HCV или HBsAg, отбирали для повторного исследования в тех же тест-системах и подтверждающих тестах.
  • Все серонегативные образцы исследовали методом ПЦР на наличие РНК HIV, HCV и ДНК HBV.
  • В течение 2008 года ПЦР-исследования проводили на аппаратах Cobas Ampliprep/ Cobas Amplicor ( компания Roch, Швейцария) с использованием тест-систем: Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor HIV 1 Monitor Test , Cobas Ampliprep/ Cobas Amplicor HCV Test и Cobas Amplicor HBV Monitor Test.
Читайте также:  Диагностика образований в печени на УЗИ, диффузных изменений

С января 2009 года исследования выполняли методом ПЦР в режиме реального времени на инструментальном комплексе Cobas 201 (Roche.

Швейцария), включающем пипетирующую рабочую станцию, аппарат для автоматического выделения нуклеиновых кислот Cobas Ampliprep и анализатор Cobas Taqman для автоматического проведения амплификации и детектирования нуклеиновых кислот с использованием 5 нуклеазной технологии.

Многоканальные оптические системы прибора позволяют регистрировать флуоресцентный сигнал от исследуемого образца в каждом цикле ПЦР. Для ПЦР-анализа серонегативных образцов использовали мультиплексные тест-системы CobasTaqScreen MPX Test, разработанные компанией Roche специально для скрининга донорской крови [10].

За счет включения в реакционную смесь различных пар специфических праймеров и зондов эти системы позволяют выявлять одновременно в одной пробирке РНК HIV-1 rpyппы М и группы О, HIV-2, HCV и ДНК HBV. Образцы, при исследовании которых регистрировали нарастание флуоресцентного сигнала, считали положительными, т.е.

содержащими вирусную РНК (ДНК). Такие образцы исследовали повторно в той же тест-системе. При получении повторно положительного результата проводили идентификацию выявленной нуклеиновой кислоты с помощью указанных выше ПЦР-диагностикумов на отдельные инфекции.

Результаты исследования представлены в таблицах 1 и 2.

Таблица 1 — Результаты исследования серонегативных образцов донорской крови методом   ПЦР на комплексе Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor

Количество исследований Количество образцов, содержащих:
PHKHCV РНК HIV ДНК HBV
56 983 8

Таблица 2 — Результаты исследования серонегативных образцов донорской крови методом  ПЦР на комплексе Cobas S 201                    

Количество исследований Количество положительных результатов     в тесте МРХ Количество положительных результатов в дискриминаторном тесте на:
РНК HCV РНК HIV ДНК HBV
62 438 31 16 4

При исследовании 56983 серонегативных образцов донорской плазмы на наличие вирусной РНК (ДНК) на аппаратах Cobas Ampliprep/Cobas Amplicor с помощью диагностических тест-систем на отдельные иифекции (табл.1) было выявлено 8 образцов, содержащих РНК HCV. При этом РНК HIV-1 и ДНК HBV ни в одном из исследованных образцов выявлено не было.

При исследовании 62438 серонегативных образцов на аппаратном комплексе Cobas 201 с помощью тест-систем CobasTagScreen МРХ в 31 случае было зарегистрировано нарастание флуоресцентного сигнала, свидетельствующее о наличии в образце вирусной РНК (ДНК) (табл.2).

Дискриминаторный анализ этих образцов с помощью тест- систем на отдельные инфекции  выявил в 16-и из них РНК HCV, в 4-х. других- ДНК HBV   в низкой концентрации (менее 60 IU./ml).

Остальные 11 образцов, положительные в тесте CobasTagScreen МРХ, показали отрицательный результат в индивидуальных тестах на РНК HIV-1, РНК HCV и ДНК HBV.

Однако при исследовании образцов, содержащих ДНК HBV и образцов с не идентифицированной нуклеиновой кислотой на наличие антиНВсоr во всех случаях выявили выраженную серологическую реакцию (коэффициент позитивности колебался от 7,8 до 8,6) (табл.3).

Таблица 3 — Выявление ДНК HBV у серонегативных доноров

№ п/п Результат скринингового теста Результат ПЦР-теста на ДНК HBV Наличие Anti НВсог Наличие Anti HBs
1 + +
2 + + +
3 + +
4 + + +
5 + + +
6 + +
7 + +
8 + + +
9 + + +
10 + +
11 + + + _
12 + + +
13 + +
14 + + +
15 +

В 4-х образцах были также обнаружены антитела к HBsAg . Наличие в образцах с не идентифицированной нуклеиновой кислотой серологических маркеров HBV инфекции позволяет считать, что в них присутствует ДНК HBV в концентрации ниже предела чувствительности теста Cobas Amplicor HBV Monitor (40 IU/ml), выявляемая, однако, более чувствительной тест-системой CobasTagScreen MPX (3,3-4,4 IU/ml).

Обобщая полученные результаты, мы установили, что методом ПЦР из 119421 образцов донорской плазмы, показавших отрицательный результат в серологических тестах, выявлено 24 образца (0,02%), содержащих РНК HCV.  16 HCV -позитивных образцов имели нормальный уровень трансаминаз, в то время как в 8-и других был зарегистрирован повышенный уровень активности АЛТ.

Подобная картина может наблюдаться как  при ранней инфекции (период серонегативного окна), так и при хроническом ВГС у лиц с подавленным иммунитетом.

Данные литературы, свидетельствующие об отсутствии прямой зависимости между уровнем АЛТ и наличием РНК HCV в сыворотке крови [4] позволяют считать, что обнаружение РНК HCV в крови является наиболее информативным показателем HCV-инфекции в период серонегативного окна.

Также нами было выявлено 11 случаев ВГВ у HBsAg негативных доноров. В 4-х из них низкий уровень виремии сохранялся несмотря на наличие анти- HBS. Известно, что подобное состояние иногда может наблюдаться длительное время после клинического выздоровления от острого ВГВ.

Предполагают, что персистенция вируса в этом: случае может осуществляться в форме иммунного комплекса с анти-HBs [11]. В остальных случаях сочетание низкого уровня виремии с наличием только анти-НВсог скорее укладывается в картину «молчащей» формы хронического ГВ.

Считают, что отрицательные результаты при детекции HBsAg у больных ВГВ могут быть вызваны низким уровнем HBsAg, образованием иммунных комплексов, а также мутациями вируса в S-регионе [11,17]. Механизмы, поддерживающие низкий уровень репликации вируса при «молчащей» форме ГВ нуждаются в дальнейшем изучении.

В настоящее время к факторам, способным поддерживать персистенцию вируса в крови при «молчащей» HBV- инфекции относят инфицирование вирусом моноцитов крови, формирование иммунных комплексов с антителами, ослабленный иммунитет и коинфекцию [11,17].

Таким образом, на основании полученных результатов можно заключить, что скрининг образцов донорской крови с применением ПЦР-тестирования для выявления вирусной РНК (ДНК) позволит снизить риск посттрансфузионной передачи вирусных гепатитов В и С, за счет выявления инфицированных доноров, находящихся в периоде серонегативного окна и доноров с молчащей формой инфекции.

Алгоритм апробации донорской крови, при котором скрининг образцов методом ПЦР проводят одновременно с исследованием их в серологических тестах, позволит не только повысить инфекционную безопасность гемопродукции, но и сократить промежуток времени    от момента забора крови до выдачи ее в лечебные    учреждения,  что особенно  важно    для   сохранения компонентов с ограниченным сроком годности.

ЛИТЕРАТУРА

1.    Амосов А.Д. Гепатит В (издание 2).  Кольцов, 2001.- 128 с.

2.    Голосова Т..В., Никитин И.К. Гемотрансмиссивные инфекции.- М.., 2003.- 191 с.

3.    Карякин А.В., Скоцеляс Е.Д., Терентьева Л.А. Мониторинг безопасности донорского контингента России//Трансфузиология, 2007.- №1-2.- с.21.

4.    Майер К.П. Острый вирусный гепатит С.// В кн.: Гепатит и последствия гепатита. /Пер. с нем.- М.: ГЭОТАР Медицина,. 1999.- с.91-98.

5.    Малышев B.C., Федорова В.Д., Потехин О.Е. Маркеры вирусного                               гепатита В у доноров крови и в группах сравнения // Иммунопатология, аллергология, инфектология.-1999.- №1.- с.103-105.

6.    Рагимов А.А., Дашкова Н.Г. Основы трансфузионной иммунологии. — М., 2004.-280 с.

7.    Allain J.P. Occult hepatitis В virus infection: implication in transfusion. // Vox Sang., 2004, Vol.86, N.2, p.83-91.

Оставьте комментарий

Ваш e-mail не будет опубликован. Обязательные поля помечены *

Adblock
detector